岑祥生命科學小學堂

                               





血清是血液凝固析出的淡黃色透明液體，是血漿去除纖維蛋白後的混合物，主要成分包括蛋白質、氨基酸、糖類、維生素和多肽(如生長因子、胰島素、促生長激素)等。血清是細胞培養過程中重要的營養物質，同時也對細胞起到一定的保護作用。


纖維蛋白
纖維蛋白肉眼可見的較大物質(可達1-2 mm)。血清是在低溫條件下收集並迅速加工處理，導致一些纖維蛋白原(纖維蛋白的前身)仍存在於溶液中。雖然過濾去除了絕大部分的纖維蛋白，但解凍過程中，纖維蛋白原會再次轉化成纖維蛋白析出，形成沉澱。

磷酸鈣
磷酸鈣一種常見的沉澱物，表現為雲狀。通過倒置顯微鏡觀察，會發現許多小黑點。由於布朗運動，這些黑點可自由移動，因此常備誤認為是微生物污染。
 
少量的沉澱是血清解凍過程中的正常現象，過於澄清的血清並不代表更高的品質，也可能是「預老化」(加工過程中反復凍融盡可能的去除纖維蛋白原)的結果。雖然血清中的沉澱很難預測和阻止，但合理正確的儲存和使用方法可以降低血清中沉澱的析出，同時也可採取簡單的方式去除沉澱物。

• 血清熱滅活；
• 37 ℃水浴保溫；
• 頻繁的解凍與凍存操作；
• 解凍過程中未混合；
• 經 γ-輻射；
• 2-8 ℃ 長時間儲存；
• 在自動解凍的冰箱中儲存。

如果血清中含有大量的沉澱，我們不建議直接過濾血清。若去除這些絮狀沉澱物，可將血清分裝至無菌離心管中，以 400 g 稍微離心，上清液直接加入培養基內一起過濾。

1. 將凍存的血清移到 2-8 ℃ 的冰箱中，過夜處理；
2. 將血清移至 37 ℃ 水浴中，間歇性搖晃混勻底部的溶解物，直至全部溶解。

① 溫和的升溫過程可有效減少沉澱的產生，不推薦直接高溫解凍血清；
② 解凍之後的血清不要長時間放置在 37 ℃ 下；
③ 若血清沒有混勻且放置於高於 40 ℃ 的水浴中，底部的蛋白會變性形成沉澱；
④ 在解凍過程中，需不斷的搖晃混合以阻止形成梯度及沉澱；
⑤ 在解凍或長時間儲存之後，血清中會出現渾濁物和絮狀物；
⑥ 反復凍融會造成血清的沉澱增多，給後續處理帶來麻煩，我們建議血清的解凍/凍存次數越少越好。


血清應當儲存在-10 ℃ 或更低溫度條件下
儲存在-80℃ 下的血清，雖然在性能方面也沒有任何變化，但我們建議不要在該條件下儲存，一方面 -80℃ 會增大血清包裝瓶破裂的風險，另一方面解凍時巨大的溫度變化會導致產生更多的沉澱。
血清一旦解凍，可在2-8 ℃條件下儲存 6 週。如果解凍之後的血清儲存時間需要大於 6 週，建議分裝成合適的體積並重新凍存。