岑祥生命科學小學堂

從傳統的兔子熱原試驗、到鱟魚血中對於內毒素的凝膠反應測試，無菌製品/藥品的監管與控制已普遍化，全球對於鱟魚血試劑的用量逐年提升，美國鱟試劑大都使用採血並放生的方式，且每年積極投入鱟魚保育，美國鱟數量持續穩定成長，另一來源亞洲鱟的試劑目前則是通過將鱟魚放血致死來製造的，因而成為保育問題及來源穩定性的隱憂。保育的議題重覆浮上檯面，讓世界轉向使用試劑的重組蛋白版本，越來越多廠商重視這一塊，進而開發新型試劑。
PyroSmart NextGen™是一種可持續生產的試劑，原本鱟來源試劑LAL內的Factor C、Factor B及rProclotting enzyme全改為來自基因工程的重組蛋白rFC、rFB及rProclotting enzyme，不會使用到鱟魚的任何一滴血，為Animal free。與傳統LAL具有相同的聯級反應，也因為没有傳統LAL試劑所含的Factor G，完整去除環境中beta-glucan帶來的干擾。與第一代單一重組因子 C (rFC) 產品相比，該創新產品的主要優勢之一是 PyroSmart NextGen® 是天然來源試劑的直接替代品，不需要根據 rFC 重組試劑的要求，更改測試方法和購買新的專業儀器。

在細胞培養實驗中，水是非常重要的元素之一。水是配製培養液、緩衝液和添加劑以及提供許多輔助功能（如加熱、冷卻、清潔和沖洗）所必需的。來自水中的微生物、內毒素、無機離子（鉛、鋅等重金屬）和有機化合物（腐植酸、單寧、殺蟲劑等）等污染物皆會影響細胞的生長、形態或行為，因此細胞培養的所使用的水也受到國際標準嚴格的規定(表1)。然而，生產符合細胞培養的超純水是一個複雜的過程，需要穩定和連續的再循環、恆定的水流和高質量的材料以避免交叉污染。
表1.) 細胞培養水質標準

KPL 現為LGC 子品牌，專注於免疫分析相關試劑，全產線符合ISO13485品質規範，提供醫療檢驗產品等級之品質來供應基礎學術實驗及IVD產品研發生產應用。

生物負載(bioburden)指的是產品中存在的微生物可以是病毒、細菌和真菌，它們來自三個主要來源：製造環境、人員和包括水在內的原材料，其中一些生物體能夠形成孢子結構，這些孢子通常最能抵抗環境壓力(包括滅菌過程)。在評估生物負載時，沒有必要測試每個分離的生物體，只需測試最具抵抗力的生物體(可以通過使用熱休克篩選程序進行分離)。嗜熱桿菌的孢子(Geobacillus stearothermophilus ATCC #7953 spores)常用於監測蒸氣滅菌過程，假設嗜熱桿菌孢子比生物負載生物更具抵抗力，或者在設計上顯著超過生物負載生物的數量，嗜熱桿菌的滅菌時間將超過生物負載生物的殺滅時間。
圖1 嗜熱桿菌的滅菌時間將超過生物負載

官網及相關產品~

COVID-19疫情全球性爆發，除了研發新型冠狀病毒(SARS-COV-2)抗病毒藥物及疫苗，在短時間內篩檢出受感染的患者或無症狀感染者對於疫情控管來說更加重要，因此，國際社會努力創建和擴展可用的檢試方法。最近新型體外核酸擴增技術，逆轉錄環介導的等溫擴增（RT-LAMP)，有望提供了一種快速診斷方法。
恆溫環狀擴增法（Loop-Mediated Isothermal Amplification;LAMP）為一恆溫、具環狀形式的擴增法。RT-LAMP檢測通過識別幾個不同的序列目標RNA以高選擇性對其進行擴增，使其靈敏度和特異性相當於傳統PCR方法。有別於傳統PCR所使用的Taq 聚合酶，LAMP檢測使用 Bst 聚合酶。而這聚合酶在65 °C具高DNA strand置換能力，因此LAMP 檢測可在 65 °C恆溫條件下進行。由於減少了一系列溫度循環所，檢測時間減少到大約30-60分鐘。
反應終止後，由於在 LAMP 檢測中，Bst 聚合酶和三對primers識別目標核酸序列的不同位置，當目標核酸被放大後會釋放氫離子，因此可以利用magnesium pyrophosphate沈澱的方式，或利用SYBR Green螢光顯色來判定結果。除此之外，由於在 LAMP 檢測會使pH值改變，因此還可利用pH-sensitive dye產生之顏色改變，透過microplate reader進行檢測。[圖1]

專為使用H2O2蒸氣滅菌的製藥、食品和醫療設備行業而設計的Mesa Labs Apex生物指示劑產品，以對H2O2最具抵抗力的菌株Geobacillus stearothermophilus 12980、及304等級不銹鋼載體，不會吸收過氧化氫氣體，並以獨家技術進行孢子塗層，確保每一載體上的孢子皆是單層堆疊，免除VHP去污過程的假陽性結果。
圖一、單層堆疊的孢子。
為確保每一次的滅菌確效都是有效的，實驗室端通常會以內控流程去抽檢每一批號的生物指示劑是否有達被要求的菌數? 而菌數要求被USP 55規範，必須介於原廠宣稱結果的50-300%。然而，不同實驗室間的檢測流程、設備型號、設備準確度、培養基種類…等，是不會完全相同的，因而產生檢測結果的差異。因此ISO 14161:2000 (對終端用戶的要求)其中11.1及11.2有提及，當使用者的測試結果與製造商不同時，應向製造商諮詢，以確保與製造商使用的是相同的測試流程、測試結果具有可比對的意義。
<ISO 14161:2000>
11.1 “If the user establishes data on the nominal population count or the D-value and these are outside the limits required by the relevant standards or outside the label information, the user is encouraged to seek information from the manufacturer to ensure that the same techniques, methods, and conditions are used to obtain the data.”
11.2 “When tested, the number [of organisms] can be higher or lower than the labeled number because variations in testing procedures can influence the resulting data. The biological indicator manufacturer should be consulted to ensure that the same techniques and procedures are used…Different laboratory practices and even variations in the performance of the individual personnel can lead to different results…The user should follow the manufacturer’s recommended procedures for recovery to ensure comparable results…”
在過往的例子中，有幾個常被使用者忽略的考量因素，像是(1)稀釋管的使用，在連續稀釋的過程中，一般建議使用玻璃試管，而非塑膠試管，避免孢子沾黏於塑膠試管，最終導致菌數回收率下降；(2)在進行Heat Shock與立即冷卻的步驟時，除了溫度、時間的掌控必須精準外，使用較小的試管或圓底試管可能會使得孢子聚集而受熱不均，因而降低Heat Shock效能(原廠建議使用19.5 x 145 mm的平底玻璃管；(3)部分實驗室會使用培養基準備較容易的”塗盤法(spread plate) ”將孢子接種，然而塗盤法，可能會造成孢子生長區域較小而不容易生長成肉眼可見的菌落大小、或是產生swarming的狀況造成計數上的誤差，因此原廠建議使用”傾注法(pour plate)”接種孢子。
圖二、適當器材與方法，有助於實驗的穩定性，進而獲得更真實的菌數回收率。
從Apex不銹鋼載體機械分離孢子的潛在差異
除了上述3個因素外，孢子分離更是個非常重要的環節，Mesa Labs建議各實驗室在使用超音波震盪器(sonicator)將孢子從不鏽鋼載體分離時，執行in-house的測試流程，並求特別留意下述幾點:
1. ”超聲處理之前脫氣”是重要的步驟，這部分會直接影響到孢子是否有從載體上完全分離，因此在放入孢子樣品前，事先啟動超音波震盪器運作5 min，讓水域中的氣體被震出(脫氣)，實際執行孢子樣品的超音波震盪時，震波才會完全針對樣品作用，而非有一部分震波用於脫氣。
2. 避免將孢子樣品直接放置超音波震盪器底部，底部傳導和水浴傳導的效能是不同的，也盡可能以金屬架而非塑膠架，塑膠架相較容易吸收震波強度。
3. 超音波震盪器的效能與震波方向皆不相同，實驗室應評估最適合的轉動頻率，在整個超音波震盪過中增加移動的頻率、方向，可以讓每一樣品更均勻受到超音波作用。
同樣的產品，會因為實驗室間的檢測流程與相應的設備耗材不同，而有不同的檢測結果。向製造商諮詢除了可以細節了解差異造成的影響，也同時藉由原廠長年的經驗去修改目前出最適合、也最接近建議方法的實驗流程，確保不同結果是可相互比對的，更有助於實驗的穩定性，進而獲得更真實的菌數回收率。

現今COVID-19在世界各地造成大規模疫情，而引起COVID-19的新型冠狀病毒SARS-CoV-2主要是透過接觸及飛沫傳染，目前臨床上多使用鼻咽拭子採樣，並以RT-qPCR偵測檢體中病毒核酸的含量。隨著COVID-19的全球流行性大爆發，如何在短時間內快速又高效地篩檢出SARS-CoV-2便成了至關重要的議題。
面對臨床上海量的病患檢體，檢測人員除了需耗費大量時間處理及檢測檢體外，亦需承受處理檢體時受感染的風險。因此，為了減少操作時間及降低檢測人員受感染的風險，岑祥公司現提供您快速及高效的解決方案──COVID-19半自動檢測流程！

饋料批次培養製程在目前利用哺乳動物細胞培養進行重組蛋白及抗體生產中占主導地位，可以在生理條件下提供關鍵營養成份，從而使細胞性能達到最佳狀態。基礎培養基與補充物搭配建立饋料策略，通過饋料批次培養製程可以獲得數 g/L 級的抗體產量。對於特定細胞系，基礎培養基與補充物的匹配程度是饋料批次培養製程建立的關鍵。
 
本文將介紹一種廣泛適用的高效工作流程，旨在發現最優基礎培養基和補充物組合，建立性能優異的饋料製程。
圖1.實現高效批次饋料製程的工作流程模型
材料與方法
細胞株和培養基
本實驗採用表達抗腫瘤壞死因子(TNF-α) IgG1 抗體的 CHO-DG44 細胞株。首先將細胞株馴化至 CDM4NS0 基礎培養基(第0步驟)。選擇8種 Cell Boost 營養補充物(1、2、3、4、5、6、7a、7b)作為饋料以獲得最佳培養性能表現。由於這些營養補充物的營養成分和濃度均不相同(表1)，因此我們將 Cell Boost 1 的氨基酸莫耳濃度設置為100％，對其他營養補充物總氨基酸含量進行標準化，以排除由於營養補充物中氨基酸含量不同引起的培養表現的差異。
 
表 1.Cell Boost 營養補充物儲備溶液中的氨基酸莫耳比
備註: Cell Boost 7b用量為 Cell Boost 7a 的十分之一。
01篩選饋料營養補充物
採用 DoE 方法篩選基礎培養基與Cell Boost 營養補充物的最優組合(圖 2)。在 MODDE™ 12 套裝軟體 (Umetrics AB) 中，使用指定為 -1、0 和 +1 的低、中和高DoE 等級，將所有八種Cell Boost 營養補充物作為量化因數輸入。按照表 1，將 1 mL Cell Boost 1 分別與 0.59 mL、1.8 mL、0.57 mL、1.58 mL、1.53 mL、0.34 mL和 0.03 mL 的 Cell Boost 2、3、4、5、6、7a 和 7b 混合，製備“ Cell Boost 饋料混合物”。隨後將該平衡 Cell Boost 饋料混合物分別加到基礎 CDM4NS0 培養基中，使最大滲透壓莫爾濃度達到 400 mOsm/kg，以定義最大 DoE 等級 +1，不添加任何營養補充物為-1，添加量為最大添加量的1/2定義為0。
圖 2. 在 CDM4NS0 培養基中生長的 mAb 生產 CHO 細胞系的 Cell Boost 分批饋料培養實驗設計基質和 DoE 等級定義(第1步)。每種 Cell Boost 營養補充物具有 10 mM 的總氨基酸。
培養基準備好之後，將添加不同 Cell Boost 的 CDM4NS0 培養基用於前述單抗表達細胞系的單純批次培養，培養體積為 30 mL, 接種密度 0.3×10^6 cells/mL。接種後第三天開始每天採樣測試細胞密度、存活率、抗體濃度和代謝物(即葡萄糖、乳酸、穀氨醯胺、谷氨酸和氨)，直至細胞活率降至60％以下時終止培養。
 
02確定饋料營養補充物添加比例
使用第 1 步中確定的最優 Cell Boost 組合，進行下一輪 DoE 饋料批次培養測試(圖3)。將選定的 Cell Boost 營養補充物加到 CDM4NS0 中，以達到對應於1、0 和+1 級 DoE 的 400、500 和 600 mOsm/kg 滲透壓莫爾濃度。將細胞以 0.3×10^6 cells/mL 的濃度接種於添加了 6 mM L-穀氨醯胺的 CDM4NS0 中進行培養。自第3天起，根據圖3所示每天添加一次補料。
圖3.在 CDM4NS0 培養基中生長的 mAb 生產 CHO 細胞系的批次饋料培養實驗設計基質和 DoE 等級定義(第2步)。
 
03生物反應器驗證
將培養於CDM4NS0基礎培養基中的mAb5細胞系，在 500 mL 反應器中進行批次饋料培養，以驗證所開發的 Cell Boost混合物和補充物策略(表 2)。
 
表2.基於當前工作容積 (WV) 的不同優化補料溶液配方及每日濃度
實驗結果與討論
從而最大限度地減少培養基消耗，同時最大限度地提高活細胞天數和生產力。以低 CSPR (cell-specific perfusion rates) 優化流程可顯著降低設備成本、實驗室空間和產品稀釋度。通過在 ReadyToProcess WAVE 25 生物反應器中以恆定體積灌注速率達到 200 × 10^6 cells/mL，確定最小 CSPR 為 10 pL/cell/day，且可以產生超過 200 × 10^6 細胞/mL 的最高 VCD。 ActiPro + Cell Boost 1/3 通過使用 15 到 30 pL/cell/d 的恆定 CSPR 來減少培養基消耗，達到了類似的高 VCD。並且，成功地將穩定生產灌注運行放大到 Xcellerex XDR 50 L 生物反應器。在相似的 CSPR 下，饋料小規模培養和灌注生物反應器之間的關鍵培養參數也非常相似。在生物反應器灌注運行中，半乳糖化成分的糖基化是增加的，但在半連續模型中則是降低，可能是由於氨積累量增加。灌注運行的生物反應器可以有效延長產物生成的時間與提高生成量(更多詳細結果請洽岑祥公司)。
圖4.以CDM4NS0及ActiPro為基底進行優化後的500 mL 灌注培養結果(VCD = viable cell density; vvd = media volume per bioreactor volume per day)。
 
結論
此次測試開發了基於 DoE 的工作流程，以利用已建立的營養補充物來定義新型、高性能的灌注培養液。也驗證半連續灌注模式下的小規模模型，適用於作為篩選單一測試內的不同條件。

血清熱去活化，是每個細胞培養者經常遇到的話題。
血清熱去活化是什麼？
是否每種細胞培養都需要熱去活化的血清？
血清該如何熱去活化？
From an Art to a Science，
讓我們以科學的眼光來審視血清去活化。
 
去活化是一個應用到哺乳動物細胞培養的血清加工過程，即將血清在 56℃ 下加熱30分鐘。HyClone 作為一家血清供應商，經常被問到，是否必須熱去活化？熱去活化的目的是什麼？這篇文章中，我們解釋了熱去活化的原因以及熱去活化並不適合大部分細胞的培養。比較不同細胞株在血清中的生長性能，結果表明經熱滅活處理的血清並未表現出任何優勢，且會影響多種細胞的生長即血清熱去活化是非必須的。
  
一、簡介
在細胞培養中，血清熱去活化是許多培養者非常感興趣的話題。價格不菲的血清中含有諸如生長因數，維生素，氨基酸等珍貴物質，將它們置於 50℃ 以上，溫度長達30分鐘是完全沒有必要的。儘管如此，有些實驗室還是把胎牛血清熱去活化作為常規步驟來執行。多數實驗者並未考慮這種極端的處理會影響生長因素、維生素、氨基酸及其類似物的活性。我們的技術支援中最常被提到的問題是是否該對血清進行熱去活化，下面我們就對胎牛血清的熱去活化進行探討和解釋。
 
據調查，至少70％的研究者對血清熱去活化僅僅是因為遵照常規操作，或者說認為是理所當然的。常規熱去活化建議的溫度在 45-62℃之間，時間為15-60分鐘不等。其中最常用方法是56℃處理30分鐘。這些基本上都來源於二十世紀70年代之前，且從未被質疑。隨著血清採集、處理、加工製程的改進及提高，許多早先認為是熱去活化的原因早已不再成立。只有少數對血清進行熱去活化的研究者在實驗中證實了這一步驟的有效性和必要性。
 
熱去活化目的是為了去除血清中補體等對熱敏感的物質，但是在胎牛血清中對補體的去活化明顯沒有必要。Triglia and Linscott 曾測定了商業血清中的補體成分 [1]，他們發現胎牛血清中 C3 和 C6 的含量僅為成年動物血清的 1-3%，除主要補體 C3 之外，其它補體成分僅有成年動物的 5-50%，而 C3 在胎牛血清中幾乎不能檢出。通過補體固定實驗，我們也在多個不同批次的胎牛血清中獲得了相似的結果。即使在未稀釋的血清中，也未發現有明顯的溶血現象。另外，多數實驗室在培養前對培養液進行 37℃ 預熱的過程，對熱敏感的補體也有去活化的作用。
 
除了對補體去活化以外，熱處理也對血清中可能存在的黴漿菌具有去活化作用。多年以前，採用 450 nm孔徑的濾膜過濾加工血清時，血清中的黴漿菌污染時有發生。針對這個問題，HyClone 首家使用 100 nm 三層濾膜連續濾過技術，自從採用這項技術以及後來的 40 nm 濾過技術之後，我們的血清產品再沒有發現黴漿菌污染。持續的改進和驗證，完全消除了依靠熱去活化處理黴漿菌的顧慮，也使得熱去活化成為不必要的另外一個原因。
 
Pinyopummintr 等證明不進行熱去活化不影響牛胚胎細胞的發育 [2]。又有研究結果證實熱去活化步驟會減弱胎牛血清和小牛血清對細胞的促貼附作用 [3]。使用 SV-BHK, BALB-3T3, CV-1 和 FS-4 做細胞貼附實驗，熱去活化對胎牛血清的影響小於小牛血清。當細胞附著後，熱去活化的血清並不影響細胞的生長。針對昆蟲細胞和桿狀病毒的表達，據報導，熱去活化是沒有必要的 [4]。
 
 
二、血清熱去活化對細胞生長的影響
我們調查了熱滅活對胎牛血清及不同細胞株生長能力的影響。
表 1 詳細描述了血清熱去活化的步驟。通過比較 11 種細胞株在未處理和熱去活化血清的生長情況(見圖1)。
(1) 6 種細胞株(HBAE, MDBK、Vero, HFS(Human Foreskin Fibroblast), MRC-5 和 Mv.1.Lu)帶來負面影響；
(2) 3 種細胞株(FOX-NY, MDCK 和 CHO-K1)不受熱滅去活化的影響；
(3) 2 種細胞株(Balb/3T3 和 Sp2/0-Ag14 hybrid)的生長有輕微提高。 
所以，在正常的操作下，熱滅活對細胞的生長沒有明顯促進作用，通常會導致生長率下降。
圖 1. 11 種細胞株在未處理和熱去活化血清中的生長情況
表 1. 血清熱去活化的步驟
若操作不正確，熱去活化經常給血清產品帶來不可逆的影響。
加熱血清導致血清中產生沉澱，而這些經常被認為是微生物污染。當注意到這個現象之後，為了驗證污染的存在，或者促進沉澱的溶解，許多培養者往往將血清放置 37℃ 培養。不幸的是，這會使情況變得更糟，進一步增加血清中的沉澱。甚至有經驗的培養者和微生物學家也無法辨別兩者的區別。為了確定血清未被污染，大量的實驗如鏡檢、無菌培養試驗和革蘭氏染色等等更是浪費了實驗者大量的時間和精力。56℃處理30分鐘的熱去活化和解凍過程中不適當的混勻都會導致沉澱的形成。
56℃
熱去活化最常用的溫度是56℃，但有些操作規定要求更高的溫度，這不但進一步影響血清促生長能力，同時還會產生更多沉澱。65℃處理30分鐘的熱去活化顯著降低了 MRC-5 和 MDBK 的生長。雖然 Sp2/0-Ag14 hybrid 的生長未受影響，但無法支持 HBAE 的培養(見圖 2.)。
 
總時間
不管你有意還是無意，血清產品經常會暴露在更高溫度超過 30 分鐘。比如將血清誤放在水浴中隔夜。延長熱去活化的時間同樣會增加血清中沉澱的形成，降低血清促生長的性能。血清在 56℃ 下熱處理 30、75、120 和 1080 分鐘，並培養 HBAE, MRC-5, MDBK 和 Sp2/0-Ag14 hybrid 四種細胞(結果見圖 3)。隨著熱處理時間的延長，HBAE, MRC-5 和 MDBK 細胞的生長狀態逐漸減低。HBAE 細胞對熱去活化的血清較敏感，無法在熱處理1080分鐘的血清中生長。和提高熱處理溫度一樣，隨著熱處理時間的延長，Sp2/0-Ag14 hybrid 的生長未受影響。
 
許多因素都會影響血清熱處理的總時間。
(1) 玻璃瓶和塑膠瓶(PETG)具有不同熱容量，這直接影響加熱速率。為了減少破損，便於儲存，塑膠瓶基本上取代了硼矽酸鹽玻璃瓶。但塑膠瓶裝物加熱到 56℃ 所用的時間會增加 30% ，同樣會延長其內容物冷卻時間。
(2) 熱去活化之後血清的冷卻速率與媒介有關，如是放置於冰箱、冰櫃還是冰浴中(見圖 4)。當熱去活化的血清溫度從 56℃ 降到 10℃，冰浴冷卻只需要 30分鐘，而在冰箱中冷卻需要330分鐘。為了促進血清的加熱和冷卻可將其等分為小體積。
(3) 水浴中的水位也會影響血清加熱的速率。由於瓶子易漂浮，不適合將水浴灌滿使水位達到瓶裝血清的刻度。可採用在瓶口套一個商業化鉛塊的方式來阻止瓶子漂浮。圖 5 呈現了水位達到塑膠瓶 300 mL 和 500 mL 刻度時的加熱速率。當水位達到 500 mL 刻度線時，40分鐘就可以達到 56℃，而水位到達 300 mL 時，則需要60分鐘，增加了高溫處理的時間。
圖 2. 4 種細胞株在 56℃ 和 65℃ 熱處理血清中的生長情況
圖 3. 延長血清熱去活化時間對 4 種細胞生長的影響
圖 4.  血清在冷浴或冰箱中的冷卻速率
圖 5. 不同水位(300 mL 和 500 mL)下的加熱速率
總之，多數細胞培養中血清的熱去活化並不是必要的。許多情況下，血清熱去活化並不會改善細胞的生長性能，可能還會帶來負面影響。即使對少數細胞有促進作用，其促進的效果也微不足道。另外，血清的熱去活化會產生沉澱，這常常被認為是微生物污染，給用戶和供應商帶來不必要的麻煩。我們建議，那些進行血清熱去活化的用戶，針對其使用的細胞或培養系統，需要通過試驗來證實其必要性。與建議的傳統熱去活化溫度和時間相比，在實際操作過程中，我們經常會無意間會將血清加熱到更高的溫度，延長加熱的時間。如果血清熱去活化是必須的，需要嚴格監測並選擇一個可重複的方案操作。

岑祥所代理的RayBiotech原廠通過醫療器材製造認證ISO13485，且符合GLP/GMP FDA相關法規，為全球第一研發生產抗體陣列 (Antibody Array)，至今應用多樣及文獻豐富；岑祥代檢實驗室通過RayBiotech認證產品操作實驗室，並被授權提供原廠Antibody Array及ELISA等全產品線試劑代檢服務。

目前已有三千多項關於病毒載體正在進行臨床試驗，其中約10%是以慢病毒載體進行的。慢病毒載體通常是透過多種質體載體瞬時轉染到HEK293T細胞而產生的，病毒會釋放到上清液中，因此要將細胞培養液中的細胞/雜質移除，而在CAR-T研究中則是缺乏建立LV澄清的黃金方法。常規標準使用以離心機分離再進行上清液微孔濾膜澄清，但是僅透過單一步驟的過濾再加上DE助濾劑的輔助，將可有效捕獲和澄清LV，且提高LV純化和T細胞轉導效率。
實驗目的和總結:
主要使用含有矽藻土(DE)之Sartoclear Dynamics^® Lab V50來澄清懸浮細胞HEK293產生的慢病毒載體(Lentiviral vectors, LV)，透過使用實驗設計(DOE)分析Sartoclear Dynamics^®Lab V50和與標準法比較，結果發現:
1. 高濃度DE雖降低感染力價，但有利降低濁度和加快過濾時間。
2. 較低濃度DE有利回收高LV力價。
3. 與標準法比，Sartoclear Dynamics^®Lab V50可更好的將濁度/汙染物降低、提升過濾能力和提升整體膜的使用容量。
4. 相比標準法，更快、更安全進行處理，且減少耗材使用量。
5. Sartoclear Dynamics^®Lab V50適用於捕獲和澄清慢病毒載體。
實驗結果:
一、使用MODDE^® software (Sartorius)在DOE研究中評估DE濃度和接觸時間對濁度、感染力價和過濾時間的影響:
1. 當DE濃度升高，感染力價呈線性下將。
2. 隨著DE濃度的增加，過濾時間減少。
3. 隨著樣品與DE的接觸時間越長，濁度線性降低。

二、評估Sartoclear Dynamics^®Lab V50對處理時間的影響:
1. 使用標準法，大約25ml後，第一個Sartolab^®RF50過濾器堵塞，因此需使用第二個Sartolab^®RF50將剩餘液體過濾，費時費力。
2. 使用Sartoclear Dynamics^®Lab V50因不需再進行離心，可有效降低總處理時間3.8倍。

三、評估Sartoclear Dynamics^®Lab V50對濁度和過濾器容量的影響:
1. 標準法:濁度可至43NTU (89 %降低)。
2. 使用Sartoclear Dynamics^® Lab V50 (5g/L DE)，可將濁度降到21NTU(95%降低)。
3. 搭配最少量5g/L之DE，來確認澄清過濾器的容量，直到過濾阻塞為止，發現Sartoclear Dynamics^®Lab V50 可裝置超過50ml的容量，標準僅約過濾33ml時發生阻塞。

四、評估Sartoclear Dynamics^®Lab V50去除雜質的影響:
1. 約10 g/L的DE會增加蛋白質和dsDNA的移除。
2. 10 g/L~40 g/L之間的較高DE濃度，移除能力沒有明顯增加。
3. 與常規離心後，再澄清方法相比，不論DE濃度為何皆顯著提高雜質移除濾。

★最後跟大家複習如何操作Sartoclear吧!

將矽藻土倒入細胞培養液中進行均勻混合→將過濾裝置與真空馬達相連接→將含有矽藻土之細胞培養液倒入過濾裝置→真空過濾→過濾即完成。
◎原廠商品資訊請點我