岑祥生命科學小學堂

你是否還在為血清凍融問題所困擾！
未用完的解凍血清是否可以繼續凍存使用！！
多次凍融是否影響細胞生長和血清品質！！！
HyClone 通過科學的實驗資料
來為你“排憂解難”


材料與方法
選取任一批次 HyClone Cosmic Calf™Serum (加強型小牛血清-貨號：SH30413)和 HyClone Characterized Fetal Bovine Serum (澳洲優級胎牛血清-貨號：SH30084)用於此研究。
(1) 每個批次選取 5 瓶並標記1×到5×
(2) 瓶1×保持凍存狀態，瓶2×至 5×常溫解凍。
(3) 在解凍過程中，每 20-30分鐘混合操作一次。
(4) 待完全解凍後，立即於-20℃ 下重新凍存至隔夜。
(5) 瓶 3×至瓶 5×分別再進行1次、2次、3次凍融。


生長研究
選取 5 種細胞株，測定各個血清的培養性能。表 1 中列出了細胞株及基礎培養基的類型。所有的培養基需添加 10% 的待測血清。針對貼壁細胞，以1.0×10⁴/cm² 的活細胞密度接種到 T25 培養瓶中(三個平行試驗)。當細胞融合率達到90%時，計數。若為懸浮細胞，以 8.0×10³/mL 的活細胞密度接種到 T25 培養瓶中，從第三天開始，每天計數一次，直到細胞活率下降(培養條件：37℃ 5%CO₂)。


生化分析
所有瓶裝血清樣品進行生化實驗測定，確定血清成分是否有明顯變化。


沉澱分析
比濁法測定樣品中的沉澱物，並通過肉眼檢測的方法判斷多次解凍/凍存是否會增加微粒物質的數量。

表1. 細胞及培養基類型


結果與討論
◉ 圖1到圖5是細胞生長的結果，細胞密度沒有明顯的變化。
◉ 血清生化分析結果(可向岑祥詢問)，血清成分沒有明顯的變化。
◉ 濁度分析結果(表2)表明微粒物質的數量沒有明顯的變化。所有結果都經肉眼確認。



圖 1. MRC-5 細胞生長結果(DMEM +10% FBS(A)或加強型小牛血清(B))


圖 2. VERO 細胞生長結果(DMEM +10% FBS(A)或加強型小牛血清(B))


圖 3. CHO-K1 細胞生長結果(Ham’s F12 +10% FBS(A)或加強型小牛血清(B))


圖 4. FOX-NY 細胞生長結果(DMEM +10% FBS(A)或加強型小牛血清(B))


圖 5. Sp2/0-Ag14 細胞生長結果(DMEM +10% FBS(A) 或加強型小牛血清(B))


表 2. 血清濁度分析結果(多次解凍/凍存)


結論
經過 5 次解凍/凍存迴圈的血清在細胞生長性能、生化分析資料和濁度方面沒有明顯的變化，我們認為血清經多次解凍/凍存迴圈(可達5次)之後，不會影響細胞的生長。雖然測定資料顯示，經過多達 5 次解凍/凍存血清性能並未出現明顯的下降，但反復凍融會造成血清的沉澱增多，給後續處理帶來麻煩，我們建議血清的解凍/凍存次數越少越好。